(1)主要因素
①材料的选择
ⅰ不同植物的诱导成功率很不相同。
ⅱ就同一种植物来说,花期早期时的花药比后期的更容易产生花粉植株。
ⅲ一般来说,在单核期,细胞核由中央移向细胞一侧的时期,花药培养成功率最高。
②培养基的组成
(2)其他因素
4.花药培养的实验操作
(1)材料的选取
①花粉的鉴定:一般通过镜检来确定花药中的花粉是否处于适宜的发育期。
②镜检方法:最常用的方法是醋酸洋红法。但是,某些植物的花粉细胞核不易着色,需采用焙花青-铬矾法,这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。
(2)材料的消毒
①将花蕾放入体积分数为70%的酒精中浸泡约30 s,立即取出,在无菌水中冲洗,后用无菌吸水纸吸干。
②放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2~4 min,再用无菌水冲洗3~5次。
(3)接种
①剥离花药时,尽量不损伤花药,彻底去除花丝。
②每瓶接种花药7~10个。
(4)培养
①温度: 25 ℃左右。
②光照:开始不需要光照,幼小植株形成后才需要光照。
③转移:将愈伤组织及时转移到分化培养基上;如果释放出胚状体,尽快将幼小植株分开,分别移植到新的培养基上。
(5)鉴定和筛选:鉴定染色体倍性的变化,并进行筛选。