酶固定。

(2)方法步骤

①乳糖酶的溶解：准确称取乳糖酶100 mg，然后将其溶解在pH7.3的磷酸缓冲液中，其中单体Arc浓度为质量分数20%，交联剂Bis浓度为质量分数5%。

②聚合：将含有0.6 mL N，N，N′，N′－四甲基乙二胺和200 mg过硫酸铵的4 mL磷酸缓冲液迅速倒入乳糖酶的溶解液中，缓慢搅拌混匀，4 ℃条件下进行聚合反应30 min。

③漂洗：聚合反应完成后形成凝胶，用小刀切成小块，用缓冲液洗涤4～6次，0～4 ℃保存备用。

1.固定化酶依据的原理与其优点分别是什么？

答案　将酶固定在不溶于水的载体上，使酶既能与反应物接触，又能与产物分离；同时，固定在载体上的酶还可以被反复利用。

2.固定化乳糖酶的制备

(1)制备固定化乳糖酶时为什么要用缓冲液配制凝胶单体？

答案　酶活性易受温度和酸碱度的影响，用缓冲液配制凝胶单体能保持溶液中pH的相对稳定，从而保证实验过程中酶的活性。

(2)漂洗凝胶的目的是什么？

答案　将凝胶表面没有固定的乳糖酶冲洗干净。

归纳总结　固定化酶及其制备的2点总结

(1)固定化酶的优点

①同一批固定化酶能在工艺流程中重复多次地使用；

②固定化后，和反应物分开，有利于控制生产过程，同时也省去了热处理使酶失活的步骤；

③稳定性显著提高；

④可长期使用，并可预测衰变的速度；

⑤提供了研究酶动力学的良好模型。

(2)固定化乳糖酶时的注意事项

①乳糖酶溶解时为了保持酶的活性，需使用磷酸缓冲液。

②缓冲液反复冲洗一方面针对形成凝胶后表面还有一些酶没有包埋在凝胶内部的微孔中被冲洗掉，另一方面维持酶的活性。

③Arc和Bis都是神经性毒剂，操作过程中注意不要沾到皮肤上和吸入体内，一旦沾到皮肤上要立即用水冲洗。

④聚合反应和试剂的质量有很大的关系，如果在教材规定的时间内还没有聚合完成，可以适当延长聚合时间。